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毛細(xì)血管電泳儀取樣技術(shù)要求很高,規(guī)范操作很重要

更新時(shí)間:2021-02-24點(diǎn)擊次數(shù):1219
   毛細(xì)血管電泳儀是一種用于生物領(lǐng)域的分析儀器,它以毛細(xì)管為分離通道,以高壓DC電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,利用帶電粒子之間的遷移率差和分布系數(shù)差進(jìn)行分離。它的出現(xiàn)使分析科學(xué)繼液相色譜之后又一次大的進(jìn)步,使分析科學(xué)從微升級(jí)到納米升級(jí),不僅使單細(xì)胞甚至單分子分析成為可能。用于分析時(shí),取樣技術(shù)要求很高,用戶在使用時(shí)應(yīng)規(guī)范操作
  1.注射區(qū)越小越好:
  無(wú)論采用何種進(jìn)樣方式,毛細(xì)管插入樣品溶液的深度一般小于毛細(xì)管總長(zhǎng)度的1% ~ 2%,以盡量減小樣品溶液被毛細(xì)吸收到毛細(xì)管中的影響樣品管中的溶液小于5L,進(jìn)樣量為1 ~ 50 NL。
  2.注射時(shí)間應(yīng)該短:
  通常注射時(shí)間為0.5 ~ 1s,此時(shí)粘附在毛細(xì)管上的樣品量相對(duì)于吸入量可以忽略不計(jì)。
  雖然毛細(xì)血管電泳儀的進(jìn)樣時(shí)間可以達(dá)到0.1s,但當(dāng)毛細(xì)管插入樣品管時(shí),不可避免地會(huì)有一些溶液粘附,因此進(jìn)樣時(shí)間短會(huì)影響分析的重復(fù)性。
  3.樣品的預(yù)濃縮:
  受毛細(xì)管總體積的限制,毛細(xì)管電泳不能像高效液相色譜那樣通過(guò)增加進(jìn)樣量來(lái)提高檢測(cè)靈敏度,但可以采取一些措施來(lái)提高靈敏度。
  首先當(dāng)樣品緩沖液的電導(dǎo)率明顯低于電泳緩沖液的電導(dǎo)率(100倍以上)時(shí),在毛細(xì)管兩端施加電壓后,可在樣品區(qū)帶前后形成較大的電場(chǎng),使樣品溶液中的分子遷移更快。當(dāng)這些分子到達(dá)電泳緩沖液的邊界時(shí),由于電場(chǎng)的減弱,遷移速度變慢,使得樣品區(qū)帶變窄,濃度增加,從而達(dá)到濃縮的目的。
  其次當(dāng)樣品緩沖液的電導(dǎo)率與電極緩沖液相同,且樣品濃度相對(duì)較薄,不適合進(jìn)一步稀釋時(shí),可在注射前吸入部分水,也可達(dá)到濃縮的目的。
  不管采用什么樣的進(jìn)樣方法,上述方法都能使樣品積累和濃縮。然而由于堆積區(qū)地區(qū)的電位急劇下降,該地區(qū)的溫度將會(huì)上升。
  4.將毛細(xì)管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開(kāi)始取樣操作,完成后,應(yīng)迅速移至緩沖液中開(kāi)始電泳。否則,會(huì)出現(xiàn)毛細(xì)和虹吸現(xiàn)象,導(dǎo)致誤差和光譜帶變寬。
  5.盡可能保持系統(tǒng)不變。因?yàn)闇囟戎苯佑绊懻扯?,所以影響恒定的注入量?/div>
  6.請(qǐng)勿將電極與毛細(xì)管接觸,樣品池和緩沖池的液位高度應(yīng)保持平衡。
  7.防止樣品溶液和緩沖溶液蒸發(fā)和損失。
  8.樣品溶液中的溶劑必須與緩沖溶液互溶,前者的離子強(qiáng)度應(yīng)低于后者。

毛細(xì)血管電泳儀

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